哪位大神可以简单的说一下race的基本步骤呀

关键字：大神 更新时间：2018-04-26 15:10:50 92次访问

RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。

RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，利用锚式PCR，快速扩增cDNA末端从而获得已知mRNA内一段小序列与3‘或5’的cDNA序列技术。

实验步骤

cDNA第一条链的合成

我们建议进行cDNA合成的对照反应，这样可以对样品的cDNA的合成进行鉴定。加入各种试剂之后，在水浴中42度保温一个小时。

注意：在水浴或酒精浴中保温会减少反应体积，从而降低第一链的合成效率。

将管放于冰上，以终止第一链的合成反应。

直接进行第二链的合成。

折叠1048707cDNA第二链的合成

第二链合成的酶混合物中，含有聚合酶、RNaseH和连接酶。T4 DNA聚合酶的功能是补平dscDNA的末端。我们建议做阳性对照，试剂盒中提供人类骨骼肌的mRNA。

建议进行阳性对照,cDNA的质量取决于制备的polyA+RNA的质量。非哺乳动物样品的mRNA大约在0.5－3kb之间。

通过电泳检测cDNA的产量，与对照进行对比，这样可以有利于在以后的步骤中对cDNA进行稀释。

接头的连接及连接产物的稀释

按照程序进行连接反应。

如果没有对比样品和对照的产量，利用Tricine－EDTA buffer制备接头连接的dscDNA的1/50和1/250的稀释物，用两种稀释物进行以下的RACE PCR反应，直到鉴定出哪一种稀释可以得到好的效果。

RACE RACE－－PCRPCR扩增扩增

·进行5’和3’的RACE－PCR扩增。

·利用以下的程序进行降落PCR反应：

94度30秒

5个循环：94度5秒

72度4分

5个循环：94度5秒

70度4分钟

20－25个循环：94度5秒

68度4分钟

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