大学生化实验蛋白质的变性与沉淀
在将5%的蛋白液5ml和饱和硫酸铵溶液5ml混匀沉淀静置后,为什么沉淀会分为上下两层,中间是清液,下面的絮状沉淀应该是球蛋白,上面的沉淀又是什么?是蛋白质吗?
蛋白质的变性有物理变性例如加热,有化学变性例如假如强酸或强碱。
蛋白质的沉淀,有变性沉淀,有盐析沉淀,有调节等电点沉淀等。
蛋白质溶液用饱和硫酸铵沉淀属于盐析沉淀,这种方法对于同一蛋白溶液中不同种类的蛋白质沉淀的效果不同,相当于密度沉淀,类似于离心分级沉淀,在摇匀静止后,密度大的沉淀在底部,密度小的浮在上面。球蛋白分子量大,密度高,会沉淀在底部,白蛋白分子量小,密度低,会浮在上面,而硫酸铵饱和液的密度居中,所以在中间层。
楼上渝圣所说的饱和硫酸氨溶液的配制问题,那属于饱和溶液和过饱和溶液的问题。如果硫酸铵加热溶解并过滤后制得的是过饱和溶液,那么静止过夜冷却到摄氏20°,若不摇晃或者没有灰尘等杂质落入,就不会有结晶析出,一旦摇晃或者有灰尘颗粒杂质落入,则会有结晶析出,由过饱和溶液转变成饱和溶液。加热溶解的方法能够保证制得饱和溶液,而未加热溶解的方法不能保证制得饱和溶液。化学实验需要严谨,所以加热溶解才是必不可少的步骤。
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