福尔根反应检测DNA的实验中亚硫酸溶液有什么作用
专一显示DNA的一种染色法。标本经水解去掉RNA后,DNA的嘌呤-脱氧核糖糖苷键中的嘌呤被酸水解,暴露出了脱氧核糖的醛基,游离的醛基同Schiff's试剂反应,呈紫红色。
DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff(无色品红亚硫酸溶液)试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团),所以凡含有DNA的部位,就呈紫红色。而RNA用此法处理后则分解。
Unna染色法
1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁(mehtyl-green-pyronim)染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。 1940年Brachet研究证明用甲基绿-哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁
混合染料处理细胞后,由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同,而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色,RNA被哌洛宁染成红色,这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。
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