测苦荞叶片中SOD抗氧化酶的实验方法
首先提取酶，1.粗酶液的制备。 取成熟鲜叶 ,去主脉 ,准确称取 2 g ,加入预冷的酶提取液 (50 mmol/ L (p H7. 8) 磷酸缓冲液 ,内含0. 1 mmol/ L ED TA , 0. 3 % Triton X2100 , 4 %PV P) 10 mL ,冰浴充分研磨 ,在冰冻离心机上以 1. 2万转/ min 冰冻离心 20 min ,上清液即为粗酶液 ,冷藏备用。
2.酶活性测定。超氧化物歧化酶 (SOD) 活性性测 定:称取1g鲜样，加0.1mol/LTris-HCl磷酸缓冲液，1300g、4℃下离心20min，采用分光光度法测定上清液中的酶活性。以 PBS 液代替 NB T 作空白 ,以不加酶液而加等量酶提取液为最大光还原管 ,以能抑制 NB T 光化还原 50 %为一个 SOD 活力单位。
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